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玛丽传动装置

Mary Gearing是Addgene的一位科学家。她最初是一名科学传播实习生,为Addgene博188棋牌游戏客和网站撰稿。金宝搏188app下载作为一个全职的Addgenie,她仍然喜欢写关于CRISPR和其他酷质粒的博客!

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细菌的CRISPR方法:基因组工程,CRISPRa, CRISPRi,碱基编辑,等等

发布的玛丽传动装置2020年9月28日上午8点

最初出版于2016年3月3日,最后更新于2020年9月28日,由威尔·阿诺德。

虽然CRISPR系统最初是在细菌中发现的,但大多数基于CRISPR的基因组工程已经在其他生物体中发生。在许多细菌中,不同于其他生物体,crispr诱导的双链断裂是致命的异源end-joining (NHEJ)修复途径不是很健全。在许多情况下,homology-directed修复也不能有效地发挥作用,但是科学家已经设计出了利用噬菌体遗传系统促进细菌同源重组的方法。这些怪点改变了CRISPR介导的基因组工程在细菌中的功能,但不用担心——来自Addgene存款者的质粒使CRISPR在细菌中的使用比以往任何时候都更容易大肠杆菌和其他细菌种类。继续读下去,了解细菌可用的工具和它们的一些应用。

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主题:CRISPR,CRISPR表达系统和传递方法

克服了CRISPR传输的AAV尺寸限制

发布的玛丽传动装置2020年9月16日上午9点

最初发表于2015年7月14日,最后更新于2020年9月16日,作者Beth Kenkel。

CRISPR基因组编辑已迅速成为一个流行的系统在体外和种系基因组编辑,但是在活的有机体内基因编辑方法受到Cas9传递问题的限制。腺相关病毒载体(AAV)通常用于在活的有机体内基因传递由于其低免疫原性和血清型范围允许优先感染某些组织。然而,包装酿脓链球菌(SpCas9)和一个gRNA一起(约4.2 kb)形成AAV载体是一个挑战,因为它的AAV包装容量(约4.7 kb)。虽然这种方法已被证明是可行的,但它几乎没有留下额外的监管元素的空间。冯张的组之前将Cas9和多个gRNAs包装成单独的AAV载体,提高了整体包装能力,但需要对两种AAV进行纯化和合并感染。

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主题:CRISPR,CRISPR表达系统和传递方法

CRISPR 101: gRNAs的多重表达

发布的玛丽传动装置2020年9月10日上午7点45分

最初出版于2016年1月28日,最后更新于2020年9月10日,作者是Jennifer Tsang。

CRISPR可以很容易地定位多个位点——这个概念叫做多路复用。由于CRISPR是一个如此强大的系统,编辑或标记效率通常不会因在一个质粒上添加多个gRNAs而改变。听起来好吗?Addgene有很多工具可以帮助你多克隆-我们将使用哺乳动物质粒向你介绍一些潜在的选择和克隆方法,但请向下滚动适合其他模式系统的质粒,包括大肠杆菌、植物、果蝇,斑马鱼!

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主题:CRISPR,CRISPR 101,CRISPR gRNAs

CRISPR 101:胞嘧啶和腺嘌呤基编辑器

发布的玛丽传动装置2020年8月6日上午10:30

最初发布于2016年8月16日,最后更新于2020年8月6日。

当我们谈到CRISPR应用程序时,经常会出现一个负面的问题:低编辑效率homology-directed修复(HDR)。相比异源端加入, HDR发生的频率相对较低,在不分裂的细胞中,该通路进一步下调。科学家们并没有试图改进HDR,而是开发了两类碱基编辑器:胞嘧啶碱基编辑器(CBEs)和腺嘌呤碱基编辑器(ABEs)。

(也有RNA碱基编辑器,但我们只会在这里介绍DNA碱基编辑器。要了解更多关于RNA碱基的信息,请点击这篇博客:CRISPR 101: Cas13的RNA编辑)

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主题:CRISPR,基本编辑

CRISPR 101: Cas13的RNA编辑

发布的玛丽传动装置2020年7月31日上午8:30

原刊2017年11月30日,2020年7月31日更新。

Cas13酶正迅速成为CRISPR领域的主要参与者。仅在张峰的实验室确认的一年后Cas13a (C2c2)(Abudayyeh et al., 2016)他们作为rna靶向CRISPR酶采用Cas13b进行精确RNA编辑(Cox et al., 2017)。这个新的系统,称为修复(RNA编辑可编程的A到I (G)替换)是第一个RNA编辑CRISPR工具。两年后,该实验室发表了一篇关于RNA编辑器的论文,允许C编辑(救援)。我们将介绍这些工具是如何开发的,以及在研究中可以使用的方法。

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主题:CRISPR,CRISPR 101,中科院的蛋白质

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