金宝搏手机旗舰厅app登录质粒101:抗生素抗性基因

发布者帕特里克·马西在2014年1月30日上午10点29分00秒



氨苄西林结构 抗生素耐药性是分子生物学一种广泛使用的工具,但科学家很少停下来想一想它使我们的生活多么容易。质粒转化成大肠杆菌是一个相当低效的流程 - 仅有1出10000个细胞的平均!如果没有快速确定哪些细胞成功地接收到正确的质粒一些手段,科学家将花费数小时至数天努力找到自己正确的克隆。此外,质粒的存在是从细菌的角度disadventageous - 一个含有质粒的细胞必须复制质粒除了其自己的染色体DNA,花费额外的资源来维持质粒。添加抗生素抗性基因与质粒求解一次两个问题 - 它允许科学家容易地检测含有质粒的细菌时将细胞在选择性培养基中生长,并提供了这些细菌具有压力保持你的质粒。万岁(细菌)性!

什么是抗生素?

抗生素通常被定义为药剂杀灭细菌或抑制其生长。尽管最初是从天然产物来源,今天在实验室中使用的许多常见抗生素是半合成或全合成的化合物。抗生素可基于它们是否直接杀死细菌(杀菌)或生长缓慢进行分类/阻止细胞分裂(抑菌);然而,这两类之间的区别可以是一个比特的灰色地带作为在高浓度(反之亦然)时所执行的一些抑菌试剂可杀死细菌。放眼望去实验室里,你可能会发现许多在表中所列的抗生素。请注意,在这篇文章中,我们将主要集中于对抗生素革兰氏阴性菌。驻f在非细菌细胞如uture文章中,我们将详细选择酵母要么哺乳动物细胞

名称 行动模式* 工作浓度**
卡那霉素

氨基糖苷类

30S绑定核糖体亚基;造成误译 杀菌 50-100微克/毫升
大观 氨基糖苷类

30S绑定核糖体亚基;中断蛋白质合成

杀菌

7.5-50微克/毫升
链霉素 氨基糖苷类

蛋白质合成的抑制起始

杀菌

25-100微克/毫升
氨苄西林

β-内酰胺

抑制细胞壁合成 杀菌 100-200微克/毫升
羧苄青霉素

β-内酰胺

抑制细胞壁合成 杀菌 100微克/毫升
博莱霉素

诱导DNA断裂 杀菌 5-100微克/毫升
红霉素 大环内酯类

块50S核糖体亚基;抑制氨酰转

抑菌

50-100微克/毫升的EtOH
多粘菌素B

多肽

改变外膜通透性 杀菌 10-100微克/毫升
四环素 四环素

30S绑定核糖体亚基;抑制蛋白质合成(延伸步骤)

抑菌

10微克/毫升
氯霉素 50S绑定核糖体亚基;抑制肽易位 抑菌 5-25微克/毫升的EtOH

*在原核生物。**溶解用蒸馏水2O和无菌过滤器,除非另有说明。

以上表列出了一些抗生素在实验室中常见的,他们杀死细菌的机制,和一般的工作浓度。有关如何准备抗生素股票的说明,请参阅Addgene公司的参考页

还能如何抗生素在实验室中使用?

从历史上看,抗生素也被用来破坏在染色体水平的基因。Scienists他们正试图破坏或删除该基因,的编码区域内导入的抗生素抗性盒,其两个失活基因并作为所述突变的标志物。在设计这些类型的实验是不使用相同的抗性盒的突变和质粒选择最佳实践。另外,科学家可以利用电阻的损失作为用于克隆成功的标记。在这些情况下,克隆载体典型地具有两个独立的抗性盒和目的基因被克隆入/使其失活或完全消除(在的情况下Gateway克隆)一个磁带。反向选择允许科学家选择的细菌是只对保持不变的抗生素耐药性。

从替补席上提示和技巧

  • 使用新鲜的股票。大多数抗生素是粉末状的稳定,但在溶液中迅速分解。在存储等分-20ØC和避免重复冷冻/解冻循环将保持多数抗生素存活至少6个月。

  • 氨苄青霉素击穿特别快,板应witin1个月用于最佳效率。谨防卫星殖民地!

  • 羧苄青霉素比氨苄青霉素更稳定,可代替的氨苄西林在大多数应用中使用。

  • 抗生素在其sensitivitly到热和/或光而改变-不要将其添加到媒体热比约55ØC和存储板/股包裹在箔如果使用光敏感抗生素等四环素。

  • 请记住,一些大肠杆菌菌株具有天然的抗生素抗性,所以一定要确保你的质粒大肠杆菌应变是兼容!看看这个常见的列表大肠杆菌基因型和它们的自然电阻。

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