快速指南工作与果蝇2部分:与Gal4的/ UAS苍蝇控制基因表达

发布者游客的博客在2017年7月21日上午08点48分55秒


果蝇通过放大镜这个职位是贡献的来宾博客乔恩周星驰,一个免疫学博士研究生在哈佛大学。

在这个第二个我们的快速指南中有工作果蝇,您将学习如何在maniupate苍蝇你最喜欢的基因(YFG)的表达。在这里阅读的第一篇文章

一旦你已经确定了一些飞股票和其他感兴趣的试剂,接下来的问题是如何与他们无关。在某些情况下,有可能是破坏YFG的功能的突变。你可以这样突变苍蝇比较一个缺乏在相同遗传背景的突变。在其他情况下,YFG或其变异变种之一将需要过表达或撞倒。去做这个,果蝇遗传学家使用GAL4 / UAS系统。这非常有用的,但简单的系统可以让你系统地研究基因功能与时间控制和细胞类型特异性!

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与GAL4 / UAS系统

与GAL4 / UAS系统的示意图

在一个更详细的电平,与GAL4 / UAS系统是一种转录激活系统从酵母增选(1)。它是一个果蝇遗传学家的主要主力,以开启或关闭基因。GAL4是转录激活因子结合UAS增强子序列在DNA中发现。然后募集转录机器到现场进行诱导基因表达。因此,基因和siRNA编码的UAS序列的下游时的Gal4被表达仅表达。

Gal4的表达可通过任何选定的启动子来调节,并布卢明顿股票中心具有在各种导致组织特异性表达的启动子的表达Gal4的飞行。为了表达YFG在一个特定的组织类型,你队友含有飞线在你的组织类型的利益表达Gal4的无人机的控制下YFG您的飞线。您可以快速配合与各种Gal4的线条和研究基因表达的UAS-YFG线在许多不同的组织类型!

虽然投入的组织特异性启动子的声音更简单的直接下游感兴趣的基因,这种模块化系统可以节省您不必在制作飞线,你想表达YFG在一个新的组织类型,每次(详细信息创建一个新的飞线在接下来的博客文章)。例如,基因可以在多种细胞类型,通过使用不同的Gal4的驱动程序被过度表达。这是很容易给队友飞得到正确的细胞类型的表达,而不是使新飞与每次下一个新的启动子的新的假设进行测试。

控制与Gal4的多个基因/ UAS系统

人们也可以使用的Gal4驱动UAS增强子序列的控制下的多个基因的表达。例如,如果你发现了五个新的基因,并希望到一个特定的神经元的隔间内表达出来,你可以单独或同时表达出来。做笔记的,有效果的剂量控制的目的。例如,两个基因由一个Gal4驱动子的过表达将产生大约一半尽可能多的蛋白质单独各基因的过表达。

与GAL4 / UAS系统中的应用

有许多花哨的方式来使用与GAL4 / UAS系统,你可以在评论文章阅读更多关于他们(2-4)。您还可以看看我最近的文章在行动中看到与GAL4 / UAS系统()。我用与GAL4 / UAS系统击倒基因表达,救援敲除突变和过度表达的病毒基因。此外,其他的模块化表达系统存在(例如。的LexA / LexAop和酶Cre /液氧系统)的情况下,你想表达的一种细胞类型一个基因在不同的细胞类型的另一种基因(6-8)。

虽然它往往很容易得到GAL4 UAS实验并用飞线是已经上市运行,有时你必须做你自己。在我的下一篇文章中,我将解释生成自己的飞线的过程相对简单。在此期间,请务必从浏览出版物引用和网站链接我的第一篇文章并开始设计第一飞实验!


非常感谢我们的客人博客乔恩周。

乔恩·周乔恩周先生正在整理他在哈佛大学免疫学博士学位。他有将近用果蝇作为工作的实验系统方面已有十年经验。乔恩喜欢研究病原体及其主机之间永无休止的斗争。它并不总是很清楚他支持哪一方。你可以试着说服他使用Twitter@jonchowphd但他仍然写着“#”作为“英镑的象征”。

参考

1. A. H.品牌,N. Perrimon,靶向基因表达改变细胞命运和产生显性表型的一种手段。,发展118,401-15(1993)。考研结论:8223268

2。J. B. Duffy, GAL4 System in Drosophila : A Fly Geneticist’s Swiss Army Knife,创世纪34,1-15(2002).PubMed结论:12324939

3. S. E.麦奎尔,G.罗马,R. L.戴维斯,在果蝇基因表达系统:一个合成的时间和空间,遗传学趋势。20,384-391(2004)。考研结论:15262411

4。T. D. Southall, D. A. Elliott, A. H. Brand, The GAL4 System : A Versatile Toolkit for Gene Expression in Drosophila,3,1-10(2015)。考研结论:21356876

5. J.周,Z.马尔卡,I.巴托斯,S.马尔卡,J. C.卡根,环境应力无症状病毒感染过程中导致致死神经外伤,细胞宿主微生物22,48-60(2017)。考研结论:28704652

6. V.罗德里格斯,D. Didiano,C. Desplan,电动工具,用于在果蝇基因表达和克隆分析,9,47-55(2012)。考研结论:22205518。PubMed中心PMCID:PMC3574576

7. S.-L.荔,李吨,遗传镶嵌在果蝇双二进制转录系统,纳特。神经科学。9,703-709(2006)。考研结论:16582903

8. C.J。波特,B. Tasic,E. V Russler,L.梁,L.洛,则Q系统:用于转基因表达,谱系追踪,以及镶嵌分析阻抑二元体系,细胞141,536-48(2010)。考研结论:20434990。PubMed中心PMCID:PMC2883883

主题:果蝇其他

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