快速指南工作与果蝇第3部分:基因工程苍蝇

发布者游客的博客在2017年7月28日上午09时30分50秒


放大镜下的果蝇这个职位是贡献的来宾博客乔恩周星驰,一个免疫学博士研究生在哈佛大学。

在我的前两个职位,我描述了如何一起工作的基本原则果蝇作为实验模型生物体。然后我描述的Gal4的/ UAS SY干用遗传学家研究基因的功能。在这最后,我将提供一个简单的介绍,以你如何改造新的转基因果蝇学习自己喜欢的基因(YFG)。

有时候,你想使用GAL4 / UAS系统,但现有试剂不符合您的需求。如果YFG是触目惊心的新的,你可能需要做一个转基因苍蝇来研究它。这个过程是相当简单的。基本上,你把你的质粒基因的兴趣,并得到纳入生殖载体。

要开始这一过程,首先需要做一些分子克隆。根据您是否尝试过表达或敲除基因,你可能需要不同的质粒。哈佛大学的DRSC /跳闸功能基因组资源中心有过表达和击倒的各种质粒。Addgene公司也有一些昆虫媒介的考虑。一个简单的方法,看看有什么可以为浏览下Addgene公司的收藏昆虫表达系统或通过滤波由作为基因的物种。

寻找在Addgene公司的Gal4和UAS质粒

选择一个向量生成转基因飞

有选择,你想用它来生成新的飞线向量时需要考虑的几个要点:

1.你想在哪里的基因被纳入基因组?一些载体整合到基因组随机,而其他人使用的attP序列停放地点,这样就可以精确地控制在基因座的转基因结束了(1):

  • 随机插入的优点是你可以在不同的飞行线路的转基因的不同表达水平。此外,如果有需要多个转基因在一个飞行组合,其在不同位点的转基因有机会允许基因重组,使转基因可以在同一染色体上继承。
  • 定向插入允许表达YFG的不同变型线之间的直接比较,因为转基因在整个飞行相同位点中发现(即不会有定位效应)。当设计要表达多种转基因实验,记住,你需要将它们都在不同的位点结合。幸运的是,可用于集成许多停放地点。
2.你们多久才想自己过得投入使用?因为你需要确定在染色体的转基因已经整合随机插入需要更长的时间。这可以用几个交配到平衡器染色体线来完成,但没有必要有针对性的插入(在这里你会事先知道哪个染色体的停靠站点所在)。这相当于两三个星期的小的差异。

果蝇身体表型3.你想怎么选择适合自己的苍蝇?当然,载体将有抗生素抗性基因选择转化的细菌,但你可能会想,“我怎么知道我的苍蝇都期望的整合?”不要担心!在苍蝇,表型选择标记可以很容易地发现苍蝇与适当的转基因。一种这样的标记是白基因,其恢复眼睛的颜色飞其中内源基因的白色被敲除系。与您的集成苍蝇纷纷将目光投向那些从浅黄色到红色的任何地方。在颜色的变化取决于整合的基因组位点如何转录活跃的。白色基因是最常用的,但其他的选择标记包括朱色(另一种基因控制眼睛的颜色)和黄色(影响成年果蝇的体色的基因)。这是需要注意的,让你知道要寻找什么。

让您的转基因苍蝇和下游实验

一旦你感兴趣的基因被克隆成质粒,您可以把您质粒的公司。对于几百块钱,他们将注入质粒转染飞胚胎,并挑选出苍蝇在您的转基因已被纳入生殖细胞。外包质粒注射比自己做要容易得多。根据你的战略,并通过该公司提供的服务,您可能必须映射到其染色体转基因已经整合,并与染色体平衡遗传杂交进行基因稳定的飞行线路。等待了几个星期后,你的苍蝇将准备实验。

果蝇是适合于许多不同种类的根据自己的兴趣在实验分析的。你可以看一下一些基本的生存。对于那些有兴趣的开发,感兴趣的器官,如肠,可以在不同的时间在整个解剖苍蝇的寿命,以确定您的遗传操作的影响。您可以产生一些非常漂亮的免疫相似图片本文(2)。代谢测定如海马可以用来看看耗氧量。果蝇在也用癌症研究(3)。天空才是极限。正如前面提到的,在没有发现甚至基因果蝇可以研究。用一个果蝇细胞系,我研究的转录因子的T细胞分化重要的(细胞类型的适应性免疫应答,这苍蝇不具备重要的!)(4)。的力量果蝇作为模式生物处于其顺从遗传操作。

这仅仅是一个底,让你知道的至少一些可能性。基本上,如果你可以设计一个实验分析与苍蝇的作品,你可以利用的资源果蝇社区更容易测试的假设。


非常感谢我们的客人博客乔恩周。

乔恩·周乔恩周先生正在整理他在哈佛大学免疫学博士学位。他有将近用果蝇作为工作的实验系统方面已有十年经验。乔恩喜欢研究病原体及其主机之间永无休止的斗争。它并不总是很清楚他支持哪一方。你可以试着说服他使用Twitter@jonchowphd但他仍然写着“#”作为“英镑的象征”。

参考

1. J. R.贝特曼,等。通过PhiC31整合介导的盒式交换果蝇的站点特定的转型。遗传学。173,769-777(2006)。考研结论:16547094。PubMed中心PMCID:PMC1526508

2. H.江,等。细胞因子/ JAK / STAT信号介导的再生和平衡在果蝇中肠。细胞。137,1343年至1355年(2009年)。考研结论:19563763。PubMed中心PMCID:PMC2753793

3.五A. Rudrapatna,等。开发的Dyn。241。107-118(2012)。考研结论:22038952。PubMed中心PMCID:PMC3677821

4. J. R.咦等。地高辛及其衍生物通过拮抗RORγt活性抑制Th17细胞分化。性质。472,486-90(2011)。考研结论:21441909。PubMed中心PMCID:PMC3172133

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