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CRISPR活化剂:dCas9-VP64,SAM,SunTag,VPR,以及更多的比较!

发布者加布里埃尔·克劳斯在2020年10月6日上午9时15分零零秒

之前CRISPR / CAS系统的发现,基因活化跨多个基因座是一个艰巨的过程。当使用锌指蛋白或TALE蛋白,蛋白质必须重新设计的每个基因,使得大规模基因活化似乎不可能的。CRISPR / CAS系统的开发,然而,极大地提高基因激活的简单性:而不是需要的蛋白质工程对于每个基因座,CRISPR / CAS系统仅需要改变可编程引导RNA。

基因活化dCas9,也被称为CRISPRa,最初发表在2013年(Bikard等人,2013佩雷斯 - 皮涅拉等人,2013)。在未来的几年随后,创新方法大大提高CRISPRa,扩大其实用性和普及研究(的Tanenbaum等人,2014Konermann等人,2015年查韦斯等人,2015年)。

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话题:CRISPR

CRISPR方法细菌:基因组工程,CRISPRa,CRISPRi,基本编辑,以及更多

发布者玛丽杠杆在2020年9月28日上午08时00分00秒

最初发表2016年3月3日和最后更新2020年9月28日由威尔·阿诺德。

虽然CRISPR系统是在细菌中首次发现,大多数基于CRISPR基因组工程已经发生在其他生物体。在许多细菌,不像其他生物,CRISPR诱导双链断裂是致命的,因为非同源末端连接(NHEJ)修复途径并不是很稳定。在许多情况下,同源定向修复不能有效地发挥作用或者,但科学家已设计出拉拢噬菌体遗传系统的装置,以促进在细菌同源重组。这些怪癖改变细菌的方式CRISPR介导的基因组工程的功能,但没有恐惧 - 从Addgene公司存款质粒使得它比以往任何时候都更容易使用CRISPR在大肠杆菌和其他细菌种类。请阅读下文,了解可用于细菌和一些他们已经使用该应用程序的工具。

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话题:CRISPRCRISPR表达系统和交付方法

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发布者游客的博客在2020年9月24日上午9点15分00秒

2017年5月3日公布的最初和最后更新2020年9月24日

这个职位是在Broad研究所,约翰Doench贡献的客人博客,Addgene公司顾问委员会的成员,和研究所的科学家。

CRISPR技术已经取得了比以往任何时候都更容易工程师特定DNA编辑和执行功能筛选,以确定参与的目的表型基因。本博客文章将讨论这些方法之间的差异,并提供如何更好地设计gRNAs更新。你也可以找到在Addgene公司的你的下一个实验验证gRNAs验证gRNA序列数据表。这些问题的更广泛的讨论可以在两个最近的评论文章中找到(Doench等人,2017年汉纳等人。2020年)和其中的参考文献。

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话题:CRISPRCRISPR gRNAs

克服了CRISPR交货的AAV大小限制

发布者玛丽杠杆在2020年9月16日上午九时00分00秒

最初发表2015年7月14日和最后更新2020年9月16日由贝丝Kenkel。

CRISPR基因组编辑已经迅速成为一个流行的系统体外和种系基因组编辑,但体内基因编辑方法已经通过Cas9交付问题的限制。腺相关病毒载体(AAV)通常用于体内基因递送由于它们的低免疫原性和血清型允许某些组织的优先感染的范围。然而,包装化脓性链球菌(SpCas9)和gRNA一起(〜4.2kb的)转换成的AAV载体是具有挑战性由于AAV的包装容量(〜4.7kb的)。虽然这种方法已被证明是可行的,它留下的小房间额外的调控元件。张枫的组先前封装Cas9和多个gRNAs成单独的AAV载体,从而增加整体包装容量,但必须进行纯化和两个AAV的共感染。

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话题:CRISPRCRISPR表达系统和交付方法

CRISPR 101:gRNAs的多重表达

发布者玛丽杠杆上2020年9月10日上午07时45分00秒

最初发表2016年1月28日和最后更新2020年9月10日由珍妮弗曾。

CRISPR可以很容易地针对多个位点 - 称为概念。由于CRISPR就是这样一个强大的系统,编辑或标记效率,当你一个质粒上添加多个gRNAs通常不会改变。听起来不错?Addgene公司有许多工具可以帮助您复用 - 我们将使用哺乳动物质粒为您介绍一些您可能选择和克隆方法,但请向下滚动以便适用于其他模型系统,包括质粒大肠杆菌,植物,果蝇,和斑马鱼!

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话题:CRISPRCRISPR 101CRISPR gRNAs

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