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CRISPR 101:gRNAs的多重表达

发布者玛丽杠杆上2020年9月10日上午07时45分00秒

最初发表2016年1月28日和最后更新2020年9月10日由珍妮弗曾。

CRISPR可以很容易地针对多个位点 - 称为概念。由于CRISPR就是这样一个强大的系统,编辑或标记效率,当你一个质粒上添加多个gRNAs通常不会改变。听起来不错?Addgene公司有许多工具可以帮助您复用 - 我们将使用哺乳动物质粒为您介绍一些您可能选择和克隆方法,但请向下滚动以便适用于其他模型系统,包括质粒大肠杆菌,植物,果蝇,和斑马鱼!

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话题:CRISPRCRISPR 101CRISPR gRNAs

CRISPR 101:RNA编辑与Cas13

发布者玛丽杠杆上2020年7月31日上午8点30分○○秒

最初发表二零一七年十一月三十日和更新的2020年7月31日。

Cas13酶迅速成为CRISPR领域的主要参与者。仅仅一年后,张枫的实验室鉴定Cas13a(C2C2)(Abudayyeh等人,2016),其为RNA靶向CRISPR酶,它们适于Cas13b精确RNA编辑(Cox等,2017)。这种新的系统,称为REPAIR(RNA编辑可编程A至I(G)置换)为RNA编辑第一CRISPR工具。两年后,该实验室上的RNA编辑器,允许C向U编辑(救援)发表了一篇论文。如何将这些工具被开发和潜在的方式,你可以在你的研究,使用它我们将穿行。

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CRISPR 101:反CRISPR蛋白质关机CRISPR-CAS系统

发布者1188金宝搏亚洲 于2020年7月23日上午九点20分27秒

2017年5月23日,最初发表和最后更新2020年7月23日由珍妮弗曾。

CRISPR-CAS技术也在不断发展。CAS大全MSDS蛋白质的变体可用于基因组编辑激活基因表达阻遏基因表达多得多。但有一件事是失踪:一种方法来关闭到CAS的活动。值得关注的是,较长的CAS的细胞保持活性,更大的机会有以发生脱靶编辑。虽然使用方法开关CAS的活动要么毒品已经开发,该领域缺乏一个“关闭开关”核证机关的蛋白质。

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CRISPR 101:表观遗传学和编辑的表观基因组

发布者玛丽杠杆在2020年6月24日下午1时45分零零秒

最初发表2017年2月14日和更新的2020年6月24日。

表观遗传修饰超过基因表达控制的附加层,超越基因组序列。表观基因(表观遗传修饰的整个基因组的总和)的失调已经牵涉疾病状态,和靶向表观基因可能使某些方法中,像的细胞重新编程iPS细胞, 更高效。通常,表观遗传染色质修饰与在基因表达的改变相关,但因果关系和机制尚不清楚。今天,在特定的基因组位点有针对性的表观遗传修饰可能使用CRISPR和Addgene公司为此具有的一些工具。

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CRISPR 101:核糖核蛋白(RNP)输送

发布者安德鲁·斯特德上2018年9月6日上午08时02分59秒

CRISPR大大提高了科学家进行基因组改变的能力,带来基因组工程的一场革命,新技术迅速被开发出来。执行CRISPR实验需要交付的,至少,两个组件:Cas9蛋白质和定位你感兴趣的基因组位点指导RNA(gRNA)。这通常是通过转染细胞用质粒进行的,如PX459,其编码Cas9,并包含一个网站,将自定义gRNA。虽然这种方法已被证明是科学家非常有价值的,有必须使用这种方法时,必须考虑一些潜在的并发症:

  1. 细胞必须是适合于转染或病毒转导
  2. 合适的启动子必须选择两个Cas9和gRNA表达
  3. 质粒DNA可掺入到基因组中
  4. 脱靶效应,可能会发生由于长时间Cas9表达
  5. 对于Cas9转录和翻译的延误编辑要求
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话题:CRISPRCRISPR 101CRISPR表达系统和交付方法

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