所有文章

CRISPR方法细菌:基因组工程,CRISPRa,CRISPRi,基本编辑,以及更多

发布者玛丽杠杆在2020年9月28日上午8时00分00秒

最初发表2016年3月3日和最后更新2020年9月28日由威尔·阿诺德。

虽然CRISPR系统是在细菌中首次发现,大多数基于CRISPR基因组工程已经发生在其他生物体。在许多细菌,不像其他生物,CRISPR诱导双链断裂是致命的,因为非同源末端连接(NHEJ)修复途径并不是很稳定。在许多情况下,同源定向修复不能有效地发挥作用或者,但科学家已设计出拉拢噬菌体遗传系统的装置,以促进在细菌同源重组。这些怪癖改变细菌的方式CRISPR介导的基因组工程的功能,但没有恐惧 - 从Addgene公司存款质粒使得它比以往任何时候都更容易使用CRISPR在大肠杆菌和其他细菌种类。请阅读下文,了解可用于细菌和一些他们已经使用该应用程序的工具。

了解更多信息>

话题:CRISPRCRISPR表达系统和交付方法

克服了CRISPR交货的AAV大小限制

发布者玛丽杠杆在2020年9月16日上午九时00分00秒

最初发表2015年7月14日和最后更新2020年9月16日由贝丝Kenkel。

CRISPR基因组编辑已经迅速成为一个流行的系统体外和种系基因组编辑,但体内基因编辑方法已经通过Cas9交付问题的限制。腺相关病毒载体(AAV)通常用于体内基因递送由于它们的低免疫原性和血清型允许某些组织的优先感染的范围。然而,包装化脓性链球菌(SpCas9)和gRNA一起(〜4.2kb的)转换成的AAV载体是具有挑战性由于AAV的包装容量(〜4.7kb的)。虽然这种方法已被证明是可行的,它留下的小房间额外的调控元件。张枫的组先前封装Cas9和多个gRNAs成单独的AAV载体,从而增加整体包装容量,但必须进行纯化和两个AAV的共感染。

了解更多信息>

话题:CRISPRCRISPR表达系统和交付方法

Nanoblades:微小的CRISPR忍者的基因组编辑细胞难

发布者1188金宝搏亚洲 在2019年9月26日上午08时50分00秒

CRISPR是一个简单和灵活的工具,用于基因组工程,但它的效用取决于其能否浸润细胞。对于选项CRISPR递送包括质粒转染,RNP电和病毒转导;但这些方法不能足够隐形以访问某些细胞和组织,如人诱导多能干细胞(人iPS细胞)。Nanoblades,由开发出一种新CRISPR交付​​方法利玛窦实验室T. Ohlmann实验室,增加了一个隐蔽的工具来CRISPR工具箱。

了解更多信息>

话题:CRISPRCRISPR表达系统和交付方法

移动CRISPRi:把CRISPRi到多元细菌

发布者1188金宝搏亚洲 上2019年4月4日上午八时53分46秒

绝大多数细菌的驯化的工具,科学家们可以用它来研究它们,这限制。例如,基因敲低与CRISPR干扰(CRISPRi)因为它具有挑战性,引进CRISPRi机械成不同的菌种一直仅限于实验室适应的细菌。现有的协议可以传输CRISPRi成单一细菌菌株,如枯草芽孢杆菌或窄范围的细菌物种,如的人的肠道菌群B.多形拟杆菌结核分枝假单胞菌大肠杆菌。然而,许多非模型菌种缺乏遗传工具。

了解更多信息>

话题:CRISPRCRISPR表达系统和交付方法

CRISPR 101:核糖核蛋白(RNP)输送

发布者安德鲁·斯特德上2018年9月6日上午08时02分59秒

CRISPR大大提高了科学家进行基因组改变的能力,带来基因组工程的一场革命,新技术迅速被开发出来。执行CRISPR实验需要交付的,至少,两个组件:Cas9蛋白质和定位你感兴趣的基因组位点指导RNA(gRNA)。这通常是通过转染细胞用质粒进行的,如PX459,其编码Cas9,并包含一个网站,将自定义gRNA。虽然这种方法已被证明是科学家非常有价值的,有必须使用这种方法时,必须考虑一些潜在的并发症:

  1. 细胞必须是适合于转染或病毒转导
  2. 合适的启动子必须选择两个Cas9和gRNA表达
  3. 质粒DNA可掺入到基因组中
  4. 脱靶效应,可能会发生由于长时间Cas9表达
  5. 对于Cas9转录和翻译的延误编辑要求
了解更多信息>

话题:CRISPRCRISPR 101CRISPR表达系统和交付方法

点击此处订阅Addgene公司博客金宝搏188app下载
订阅

所有主题

查看全部

最近的帖子