所有文章

3个技巧以提高人体细胞HDR效率的CRISPR编辑

发布者游客的博客上2017年9月5日上午09时58分42秒

这个职位是贡献的来宾博客多米尼克帕凯和Dylan Kwart从路德维希 - 马克西米利安大学和慕尼黑马克·泰西-Lavigne的实验室在纽约洛克菲勒大学。

CRISPR / Cas9系统是许多生物和模型系统的精确的基因编辑的多功能工具。我们使用CRISPR / Cas9广泛用于制造人类序列特异性改变的目的诱导多能干细胞(iPS细胞)。所述CRISPR / Cas9络合物是在引入双链断裂(DSB的)插入基因组DNA在许多细胞类型非常有效的并且常常导致在双等位基因的修改。最常见的双链断裂被修复非同源末端连接(NHEJ)通路,导致非特异性核苷酸插入,缺失或其他突变,被称为“插入缺失”。虽然这是方便产生基因敲除,NHEJ修复不允许出台具体的序列变化。

了解更多信息>

话题:CRISPRCRISPR协议和技巧

提示为大连第一时间CRISPR用户(由第1时间CRISPR用户)

发布者莱拉Haery于2017年3月7日上午十时30分00秒

我们都知道,在实验室里经常有小动作是做实验,但有关,没有人会谈至关重要。故障排除后几个月,这些人谁没有告诉你,本质的东西问难以置信,“你真的没加5毫米八角3微升?”这是我期待的时候我开始让我的第一次CRISPR / Cas9基因编辑。我想使基因失活BRAF在A549细胞(人肺癌细胞系),只有通过Addgene公司的病毒服务获取病毒和科学论文(GASP)的方法,部分武装(激酶在几种人类癌症牵连)。让我高兴的,不仅是我能够做出修改,而不危及火星菊苣根的任何试剂级,但考虑到这是在大海捞针式的目标针,这是非常容易。这是真的,我CRISPRed。在这篇文章中,我将总结的基本步骤和分析,并给予我认为是执行和分析使用Addgene公司的慢病毒CRISPR工具的基因编辑的每一个步骤的主要秘诀。

了解更多信息>

话题:CRISPRCRISPR协议和技巧

对于CRISPR基因分型测序选项

发布者游客的博客在2016年10月4日上午10点30分00秒

这个职位是贡献的来宾博客瑟伦霍夫,主管科学作家在188棋牌游戏桌面遗传学

一个在CRISPR实验过程中最重要的步骤是验证编辑。不管你使用哪种CRISPR基因组编辑系统,但是仍然存在观察到的表型是由一个脱靶基因突变,而不是在靶基因的编辑造成了机会。

验证过程,也被称为CRISPR基因分型,是展示基因型和表型分析之间的因果关系是至关重要的。验证这些连接可以帮助缓解重现危机在生物学中。作为CRISPR使用生长在生命科学和建立标准化的验证技术为学术界,产业界,特别是门诊关键是要解决这些问题。188棋牌游戏

了解更多信息>

话题:CRISPRCRISPR协议和技巧

投球MMEJ作为基因编辑的替代路线

发布者玛丽杠杆于2016年2月23日上午10时30分00秒

如果你遵循CRISPR研究,你知道所有有关使用非同源末端连接(NHEJ)使缺失或同源定向修复(HDR)创建精确的基因组编辑。但你有没有听说过的另一双链断裂修复机制:MMEJ(microhomology介导的末端连接)?MMEJ,替代末端连接的一种形式,需要进行维修仅非常小的同源性的区域(5-25个碱基),使其更容易构建靶向载体。Addgene公司存款山本贵司的实验室已经网罗MMEJ创建CRISPR基因的新方法敲入,称为间距(Precise一世ntegration成ŤARGETromosomes)。他们使用间距质粒,GFP敲入细胞系可以在大约一个半月的时间来创建,而不需要同源臂的复杂性克隆。

了解更多信息>

话题:CRISPRCRISPR协议和技巧其他CRISPR工具

CRISPR协议基因缺失在哺乳动物细胞系[视频]

发布者游客的博客于2015年2月18日上午10时09分22秒

以下职位是贡献的丹尼尔·鲍尔和马修Canver波士顿儿童医院和哈佛大学医学院Addgene公司是自豪地介绍一个在CRISPR文章的视频转载“基因缺失的产生在经由CRISPR / Cas9哺乳动物细胞系”,从杂志可视化实验(JOVE)。通过视频公布斯图尔特Orkin酒店丹尼尔·鲍尔实验室详细介绍了使用CRISPR / Cas9的创建在哺乳动物细胞系的基因组缺失。下面鲍尔和Canver讨论这项研究背后的动机。

使用CRISPR / Cas9进行有针对性的基因缺失

我们受到启发使用锌指核酸酶线束生产基于金的实验和同事染色体内缺失非同源末端连接修复(NHEJ)[1]。我们的最初的工作是与TALEN的,与Porteus实验室[2]的协作。随着CRISPR / Cas9的到来,我们开始在不同位点的探索配对的双链断裂(DSB)的方法。我们惊喜通过该方法的效率感到惊讶。一个观察是缺失的大小和频率[3]之间的反比关系。

了解更多信息>

话题:CRISPRCRISPR协议和技巧

点击此处订阅Addgene公司博客金宝搏188app下载
订阅

所有主题

查看全部

最近的帖子