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这个职位是贡献的客人博客，克里斯蒂安·劳尔森康奈尔大学。

定点诱变是一种高度通用的技术，该技术可用于在适合的方式引入特定的核苷酸取代（或缺失）。该方法可以用在常规克隆（引入或去除限制性位点），在调节元件的映射（以突变的启动子/中报道构建增强子），在蛋白质（以执行丙氨酸扫描诱变或关键残基的靶向取代）的功能分析，并在SNP分析（以引入质粒上下文天然存在的单核苷酸多态性）。该技术也是在这个年龄段的高度相关CRISPR;定点突变，一般适用于质粒，而且还可以促进基因组编辑。定制的突变通常通过CRISPR的同源定向修复（HDR）引入到内源DNA / Cas9诱导双链断裂。这种定点基因组编辑，需要高度同源性的内源性目标的模板，但便于维修，模板应该是Cas9切割具有抗性。如果一个质粒含有模板，定点诱变可以用于突变的PAM序列（Cas9裂解的NGG序列临界），从而使所得到的构建体诱导Cas9切割有抗性。

这个职位是贡献的来宾博客贝丝Kenkel，研究助理儿科爱荷华大学部。如果你感兴趣的客人博客，让我们知道！

分子克隆需要一些筛选克隆的方法用于插入物的存在。传统上，这已经完成与限制性内切酶消化;然而菌落PCR可以完成同样的事情在更少的时间和更少的钱。到菌落PCR的关键步骤是：1）设计的引物，以检测您的插入体的存在;2）建立了一个标准的PCR反应（引物的dNTP，使用裂解的细菌作为模板的聚合酶上清液）;和3）凝胶上运行PCR产物分析产品尺寸。本博客文章讨论了一些关键的东西进行菌落PCR时要考虑的。

在其最简单形式中，基于PCR的克隆是关于制造的DNA片段的副本，并在同一时间加入的限制位点到该DNA片段的末端，以便它可以容易地克隆到感兴趣的质粒。您可以使用类似的过程，以出挑添加到您的兴趣为插入吉布森总成。以下引物设计和PCR方法本身的步骤是非常相似的概述了我们限制克隆后有一些怪癖具体到PCR克隆过程 - 请签出后，如果您需要在下游步骤的更详细的复习。