这个职位是贡献的客人博客,克里斯蒂安·劳尔森康奈尔大学。
定点诱变是一种高度通用的技术,该技术可用于在适合的方式引入特定的核苷酸取代(或缺失)。该方法可以用在常规克隆(引入或去除限制性位点),在调节元件的映射(以突变的启动子/中报道构建增强子),在蛋白质(以执行丙氨酸扫描诱变或关键残基的靶向取代)的功能分析,并在SNP分析(以引入质粒上下文天然存在的单核苷酸多态性)。该技术也是在这个年龄段的高度相关CRISPR;定点突变,一般适用于质粒,而且还可以促进基因组编辑。定制的突变通常通过CRISPR的同源定向修复(HDR)引入到内源DNA / Cas9诱导双链断裂。这种定点基因组编辑,需要高度同源性的内源性目标的模板,但便于维修,模板应该是Cas9切割具有抗性。如果一个质粒含有模板,定点诱变可以用于突变的PAM序列(Cas9裂解的NGG序列临界),从而使所得到的构建体诱导Cas9切割有抗性。